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Gelelektrophorese und Restriktionsverdau

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Franziska Kostka

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Gelelektrophorese und Restriktionsverdau

 GELELEKTROPHORESE UND RESTRIKTIONSVERDAU VON LAMBDA-PHAGEN - DNA
Wie bekommt man die DNA ?
1. Bakterien in Medium (LB-Medium)
2. Ballenen w

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GELELEKTROPHORESE UND RESTRIKTIONSVERDAU VON LAMBDA-PHAGEN - DNA Wie bekommt man die DNA ? 1. Bakterien in Medium (LB-Medium) 2. Ballenen wachsen 3. Phagen Zugabe 4. Phagen Vermehrung Lybische Auflösung Zellen 5. Zentrifugieren 6. Resuspension-slösung duzugeben 7. Resuspension 8. Phenol /Chloroform hinzugeben 9. Phagen Lyse (Lösen sich) 10. DNA ist ein Protein 11. DNA Isolierung Vorteile Gelelektrophorese Bestimmung von Reinheit, Konzentration, Identität der DNA (Genotypisierung) Nachteile Gelelektrophorese - Produktion von Gel ist aufwendig -Handhabung ist schwierig - Wärmeentwicklung durch Stromfluss → Denaturierung von Biomolekulen evtl. Das Prinzip -Dre DNA läuft je nach Große entsprechend weit zum positiven Pol Kleine Molekule können leicht durch die Gelporen schlüpfen sind jedoch weniger negativ geladen - -große Stücke können schwer durch Gelporen schlüpten sind jedoch negativer geladen (werden stärker von Anode angezogen) - nicht lineares Laufverhalten 0 Was ist bei einer Fragmentierung vorhanden → Im Buffer müssen Mg 2+ lonen vorhanden sein → simulieren zellulären Proteingehalt → plt- und Salz-Buffer Salz → Simuliert zellulären Salzgehalt, trennen Nuklein sauren pH → Stabilisator Bsp. TAE/TRIS 6=0 Also je mehr Basen desto mehr negative Phosphatreste, desto negativer insgesamt

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K

So ein schöner Lernzettel 😍😍 super nützlich und hilfreich!

Vor- und Nachteile Gelelektrophorese, Das Prinzip

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