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Selektion transgener Zellen
Selektion transgener Zellen
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ola
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11/12/10
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Transformation: •ONA Ringe mit + ohne Fremd-DNA lassen sich zunächst nicht unter Scheiden -> Alle werden zu einer Zellkultur gegeben. - Elektroporation / Calcium-Ion Behandlung der (hier) E.Coli = Zellwand + membran durchlässiger - nur jede 1.000 Zelle nimmt ein Plasmid auf - Plasmid PBR322 enthält 2 Resistenzgene gegen Tetracyclin + Ampicillin (Antibiotika) - wird PBR322 mil dem Restriktionsenzym Pall behandelt, wird die DNA im Ampicillin-Resistensgenabschnitt aufgeschnitten. Fremd-DNA die sich dort einflügt macht die Resistenz unlesbar Selektion transgener Zellen raussuchen der Zellen, welche das gewünschte Gen aufgenommen haben Selektion: •Nach Transformation werden die E.-coli ausgelesen die das Plasmid aufgenommen haben ->Hierzu dient , Selektion " Vorgang: 1. Bakterien werden werden auf Nährboden kultiviert → E-coli die kein Plasmid aufnahmen, sterben ab, da keine Resistenz bestent - E-coli die Plasmid aufnahmen kultivieren sich 11. Mit Samtstempel wird eine Kopie dor Kolonie auf 2. Nährboden gegeben welcher Ampicillin enthält →E-coli mit Plasmid + Fremdgen überleben. Vektor pBR322 Ⓡ Plasmid mit Fremd-DNA Plasmid mit Fremd-ONA transformation Fremd-DNA Vektor pBR322 000 Plasmid ohne Fremd-ONA ohne Plasmid Batterien kdonien Seletition Medium mit Tetracylin: Alosterben der Bakterien ohne Plasmid Medium mit Ampicillin: Selektion von Bakterien Ohne Fremd-DVA übertragen der Kolonien mit Samtstempel
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