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Selektion transgener Zellen
25.10.2021
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Transformation: •ONA Ringe mit + ohne Fremd-DNA lassen sich Zunächst nicht unterscheiden ->Alle werden zu einer Zellkultur gegeben. ·Elektroporation / Calcium-Ion Behandlung der (hier) E.Coli = Zellwand + membran durchlässiger - nur jede 1.000 Zelle nimmt ein Plasmid auf - Plasmid PBR322 enthält 2 Resistenzgene gegen Tetracyclin + Ampicillin (Antibiotika) - wird PBR322 mil dem Restriktionsenzym Psil behandelt, wird die DNA im Ampicillin-Resistensgenabschnitt aufgeschnitten. Fremd-DNA die sich dort einflügt macht die Resistenz unlesbour Selektion transgener Zellen raussuchen der Zellen, welche das gewünschte Gen aufgenommen halben Selektion: •Nach Transformation werden die E.-coli ausgelesen die das Plasmid aufgenommen haben. ->Hierzu dient,Selektion" Vorgang: 1. Bakterien werden werden auf Nährboden kultiviert → E-coli die kein Plasmid aufnahmen, sterben ab, da keine Resistenz bestent E-coli die Plasmid aufnahmen kultivieren sich 11. Mit Samtstempel wird eine Kopie der Kolonie auf 2. Nährboden gegeben welcher Ampicillin enthält →E-coli mit Plasmid + Fremdgen überleben Vektor PBR322 Plasmid mit Fremd-DNA Plasmid mit Fremd-ONA transformation 00 Plasmid ohne Frend-ONA Fremd-ONA Vektor PBR322 ohne Plasmid Batterien kdonien Selektion Medium mit Tetracylin Absterben der Bakterien ohne Plasmid Medium mit Ampicillin Selektion von Bakterien Ohne Freund-DUA übertragen der Kolonien mit Samt stempel
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