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Gentechnische Werkzeuge & Verfahren | Genetik
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lotta
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PCR Restriktionsenzyme Gelelektrophorese genetischer Fingerabdruck (VNTR- & STR-Analyse) E. coli Bakterien Gentransfer: Transformation, Konjugation, Transduktion Grundoperation Gentechnik; Ablauf, Plasmide als Vektoren, Selektionsverfahren
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GENTECHNIK 2. Restriktionsenzyme 1S. 3-4 4. Biologie Klausur Genetik 3. Gelelektrophorese IS.5-6 5. Polymerase - Ketten-Reaktion (PCR) IS.1-2 6. genetischer Fingerabdruck (VNTR- & STR - Analyse) 15.7 Gentransfer IS. 8 - 10 e. coli Bakterien I S. 8 →→ Transformation IS.8 Konjugation IS. 8-9 → Transduktion IS. 9-10 → Grundoperation Gentechnik IS. 11-16 → Ablauf IS. 11-12 →→ Plasmide als Vektoren IS.12 → Resistenzgen - Selektion IS. 13-14 → Blau-Weiß- Selektion IS. 14-15 → Vergleich Selektionsverfahren IS. 15-16 ABLAUF ONA Vorlage 5' 3' TUNNUNT OÙÙÒŇOÙ Polymerase-Ketten-Reaktion DA - 3' - 5' 5' 3' NUNUNUN 1 ONONONOL ↑ freie Nucleotide 3' 5' 5' TUNNUNT ANON ↑ DNA- Primer 3' 2 TUIT OOOO 3' 5' ↑ 5' NUNUNUNU OLOMOLOUOLI 3' 3 taq-Polymerase 2 TUNUNU'NUUT™ ՈՌՈՒՈԼ 5' 5' Materialen: Thermocycler; DNA-Fragment, DNA-Primer, freie DNA - NUC- leotide, hitzebeständige Polymerase (z. B. taq- Polymerase) 1. Schritt: Denauturierung NUNUNUNU 10101010101 Erhitzen auf ca. 94°C - Wasserstoffbrückenbindung (Wbb.) werden durch die Hitze aufgebrochen → der DNA-boppelstrang spaltet sich in zwei Einzelstränge 2. Schritt: Annealing/Anlagerung TUNTU 10000 O TUNUNUNU 4ÒÕÏì,ÏÚÏÙ TUNTUNUT Mi... Langsames Abkühlen der Temperatur auf etwa 60°℃ · DNA- Primer lagem sich über Wlob an ihre komplementären Sequenzen an das 3¹- Ende des Ausgangs-DNA-Fragments 3. Schritt: Elongation/Verlängerung Temperatur wird auf ungefähr 72°C erhöht Verlängerung der primer durch Anknüpfen von Nucleotiden an die 3'- Enden mithilfe der DNA-polymerase (z. B. taq-Polymerase) v ZIEL Mit der PCR Lassen sich DNA-Abschnitte beliebig vervielfachen, sodass auch geringste genetische Spuren ausreichen, um DNA nachzuweisen & 99F. Personen zuzuordnen (z. B. bei Vaterschaftstests oder in Kriminalfällen) (Auswertung: siehe Gelelektrophorese & STR - Analyse). Ort VERGLEICH DNA-REPLIKATION Auftrennung des DNA - Doppelstrangs Synthese der komplementä- ren Stränge Primer ↓ Wiederholung der Zyklen: 20-30 Zyklen → bis zu 220-230 DNA - Fragmente Polymerase Die Vervielfältigung des DNA- Fragments läuft exponentiell ab. Beschrieben kann dies mit der Formel: f(x) = 2* (x:...
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