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DNA-Chip-Technologie
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Fejka
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11/12/13
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Übersicht zur DNA-Chip-Technologie - Aufbau DNA-Chip - Mutationsanalyse mithilfe DNA-Chip - Analyse differenzieller Genaktivität
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DNA- CHIP-TECHNOLOGIE AUFBAU DNA-CHIP • Viele Informationen auf kleinstem Raum gespeichert Oberfläche jedes Feldes in viele einzelsträngige DNA-Moleküle mit jeweils identischer Basensequenz fixiert L> dienen als Sonden" zum Aufspüren von DNA-Abschnitten mit Romplementärer Basensequenz ● • PCR- Produkte werden erwärmt L> werden einzelsträngig gemacht & auf DNA-Chip aufgetragen ● MUTATIONSANALYSE MITHILFE DNA-CHIPS Um auf mutiertes Allel hin zu untersuchen: DNA wird isoliert & relevanten DNA-Abschnitte mit PCR vervielfältigt fluoreszenzmarkiertes Nucleotid wird eingesetzt Lviele DNA-Abschnitte werden markiert ● دا ↳ enthält Sonden für verschiedene möglichen Mutationen des Allels Befinden sich in der Probe DNA-Abschnitte, die komplementär zur Basensequenz einer Sonde sind, binden sich diese & bilden Doppelstrang: => Hybridisierung komplementären DNA-Abschnitte werden auf Feld des chips gebunden 65 die nicht gebunden werden können werden vom Chip abgewaschen • Wird anschließend mit Fluoreszenz-Scanner abgetastet 2) enthält Fluoreszenz-Punktmuster & wird vom Computer ausgewertet • Felder Leuchten = Hybridisierung • Da bekannt ist, welche Basensequenz die Sonden in jedem Feld aufm Chip besitzen, kann Mutation identifiziert werden ANALYSE DIFFERENZIELLEN GENAKTIVITÄT • Gesamte mRNA wird extrahiert & mithilfe von bestimmten in komplementare DNA (CONA) umgeschrieben Vergleichszellen gewinnt L bindet an DNA-Sonden der DNA-Chips, die man aus • bekommt qualitative & quantitative Aussagen делам
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