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PCR-Methode (Polymerasekettenreaktion)
17.11.2021
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YMERASE RASE CHAIN REACTION (PCR) = Verfielfältigung spezieller DNA-Abschnitte, entspricht dem Grundprinzip der identischen Replikation 1. Denaturierung DNA Strang des zu untersuchenden Materials wird aufgetrennt/ denaturiert (durch Erhitzung auf ca. 90°C werden Wasserstoffbrückenbindungen zwischen den DNA- Doppelsträngen zerstört) • man erhält 2 DNA-Einzelstränge . 2. Primerhybridisierung Abkühlung auf 60°C, Anlagerung der Primer an 3' Enden der DNA-Einzelstränge (gemäss dem Prinzip der komplementären Basenanlagerung . 3. Polymerisation/ Synthese Temperaturerhöhung auf 70°C (optimale Temperatur des Enzyms DNA-Polymerase) Anlagerung der komplementären Nucleotide beginnend am Primer und Verknüpfung dieser durch das Enzym DNA-Polymerase . -> Synthese eines komplementären DNA-Stranges, d.h. aus 2 Einzelsträngen entstehen nun 2 Doppelstränge • durch Erhitzung können wieder 4 DNA-Einzelstränge gewonnen werden (Denaturierung), sodass der ganze Prozess von vorne beginnt . exponentieller Anstieg der synthetisierten DNA-Stränge (1-4-8-16...) Wiederholung des Vorgangs etwa 25-50 mal (grössere Zahl an Wiederholungen erhöht Risiko von fehlerhaften Kopien) Anwendung genetischer Fingerabdruck (Kriminalistik) Vaterschaftstest • Nachweis von Krankheiten (Virus-DNA) Untersuchung von DNA-Resten aus Fossilien & Klären von systematischen Verwandtschaftsverhältnissen .
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