Prokaryotische und Eukaryotische Vektoren

Die Wahl des geeigneten Vektors hängt von der Wirtszelle und dem Ziel des Experiments ab. Es gibt spezifische Vektoren für prokaryotische und eukaryotische Systeme.

Prokaryotische Vektoren

a. Plasmide

Plasmide sind die am häufigsten verwendeten prokaryotischen Vektoren.

• Können in bis zu 100 Kopien pro Wirtszelle vorkommen
• Verschiedene Plasmide können gleichzeitig in einem Bakterium präsent sein

Highlight: Die hohe Kopienzahl von Plasmiden ermöglicht eine effiziente Vermehrung der eingebauten DNA.

b. Bakteriophagen

Bakteriophagen bieten als Klonierungsvektoren zwei wesentliche Vorteile:

1. Möglichkeit, relativ große DNA-Fragmente einzubauen
2. Spezifische und effektive Übertragung rekombinanter DNA durch Infektion

Example: Der Lambda-Phage ist ein häufig verwendeter Phagenvektor, der bis zu 23 kb Fremd-DNA aufnehmen kann.

c. Hybride Vektoren

Neben reinen Plasmid- und Phagenvektoren gibt es auch gemischte Klonierungsvektoren:

• Phagemide/Phasmide: Enthalten Teile des Genoms von Phagen und Plasmiden
• Cosmide: Erlauben den Einbau relativ großer DNA-Fragmente

Vocabulary: Cosmide sind hybride Vektoren, die Eigenschaften von Plasmiden und Phagen kombinieren und besonders für die Klonierung großer DNA-Fragmente geeignet sind.

Eukaryotische Vektoren

a. Ti-Plasmid

Das Ti-Plasmid ist ein spezieller Vektor für die genetische Transformation von Pflanzen.

Definition: Das Ti-Plasmid $Tumor-induzierendes Plasmid$ stammt aus dem Bodenbakterium Agrobacterium tumefaciens und wird in der Pflanzenbiotechnologie zur Genübertragung mittels Vektoren genutzt.

b. Retroviraler Vektor

Retrovirale Vektoren sind die am häufigsten eingesetzten Vektoren für die Klonierung in Säugerzellen.

Highlight: Retroviren integrieren ihr Genom stabil in das Wirtsgenom, was sie zu effektiven Werkzeugen für die dauerhafte genetische Modifikation macht.

c. YACs (Yeast Artificial Chromosomes)

YACs sind künstliche Hefechromosomen, die als Klonierungsvektoren dienen.

• Enthalten die wichtigsten Elemente des Hefechromosoms für Replikation
• Ermöglichen die Klonierung sehr langer DNA-Fragmente

Example: YACs können DNA-Fragmente von mehreren hundert Kilobasen aufnehmen, was sie ideal für die Analyse großer genomischer Regionen macht.

Retrovirale Vektoren und Expressionsvektoren

Retrovirale Vektoren

Retrovirale Vektoren sind aufgrund ihrer Fähigkeit, genetisches Material effizient in Säugerzellen einzuschleusen, von großer Bedeutung in der Gentherapie und Zellbiologie.

Modifikation retroviraler Vektoren

Um retrovirale Vektoren sicher und effektiv zu machen, werden sie modifiziert:

1. Entfernung der viralen Gene $gag, pol, env$
2. Einbau von: Promotor Fremdgen $Insert$ Selektionsmarker

Highlight: Die Modifikation macht die Viren replikationsinkompetent, was ihre Sicherheit für den Einsatz in der Gentherapie erhöht.

Vor- und Nachteile retroviraler Vektoren

Vorteile:

• Hohe Transfektionseffizienz $fast 100$
• Stabile Integration ins Wirtsgenom

Nachteile:

• Zufällige Integration ins Genom $Risiko der Insertionsmutagenese$
• Transduzieren nur sich teilende Zellen

Example: In der Gentherapie werden retrovirale Vektoren verwendet, um defekte Gene durch funktionsfähige Kopien zu ersetzen oder neue therapeutische Gene einzuführen.

Expressionsvektoren

Expressionsvektoren sind spezialisierte Klonierungsvektoren, die für die Produktion von Proteinen in hohen Mengen optimiert sind.

Wichtige Elemente von Expressionsvektoren

Für die effiziente Expression fremder Gene in Prokaryoten sind drei Signale besonders wichtig:

1. Promotor
2. Terminator
3. Ribosomenbindungsstelle

Definition: Der Promotor ist die DNA-Sequenz, an der die Transkription beginnt. Seine Stärke beeinflusst maßgeblich die Menge des produzierten Proteins.

Unterschiede zwischen prokaryotischen und eukaryotischen Promotoren

• Prokaryotische Promotoren: Enthalten -35-Region und -10-Region $Pribnow-Box$
• Eukaryotische Promotoren: Enthalten TATA-Box und benötigen Transkriptionsfaktoren

Vocabulary: Induzierbare Promotoren ermöglichen die gezielte Kontrolle der Genexpression durch externe Stimuli, was besonders nützlich für die Produktion toxischer Proteine ist.

Highlight: Die Wahl des richtigen Promotors ist entscheidend für den Erfolg der Proteinexpression und kann je nach Anwendung und Wirtssystem variieren.

Diese detaillierte Zusammenfassung bietet einen umfassenden Überblick über Vektoren in der Biologie, ihre Arten, Eigenschaften und Anwendungen. Sie erklärt die Grundlagen der Genübertragung mittels Vektoren und hebt die Unterschiede zwischen verschiedenen Vektorsystemen hervor. Besonderes Augenmerk wird auf retrovirale Vektoren und Expressionsvektoren gelegt, die in der modernen Biotechnologie und Gentherapie eine zentrale Rolle spielen.

Seite 4: Expressionsvektoren

Expressionsvektoren sind spezialisierte Klonierungsvektor Expressionsvektor Systeme.

Definition: Expressionsvektoren sind für die Produktion von Proteinen optimierte Vektoren.

Vocabulary: Pribnow-Box - Eine wichtige Promotorsequenz in Prokaryoten.

Die Regulation der Genexpression erfolgt über verschiedene Promotortypen:

• Induzierbare Promotoren
• Reprimierbare Promotoren

Grundlagen der Vektoren in der Molekularbiologie

Vektoren spielen eine zentrale Rolle in der modernen Molekularbiologie und Gentechnik. Sie dienen als "Genfähren", die es ermöglichen, fremde DNA-Sequenzen in Wirtszellen einzuschleusen und dort zu vermehren oder zu exprimieren.

Definition und Anwendung

Ein Vektor ist ein Nukleinsäuremolekül, das als Träger von Fremd-DNA in Klonierungsexperimenten fungiert. Die Hauptanwendungen umfassen:

1. Klonierung: Vermehrung identischer DNA-Abschnitte in einer Wirtszelle
2. Vermehrung und/oder Expression spezifischer DNA
3. Genetische Veränderung von Zellen durch Übertragung von Fremd-DNA $Insert$

Vocabulary: Klonierungsvektor - Ein Vektor, der speziell für die Vermehrung von DNA-Abschnitten konzipiert ist.

Vocabulary: Expressionsvektor - Ein Vektor, der die Transkription und Translation des eingebauten Gens in der Wirtszelle ermöglicht.

Eigenschaften von Vektoren

Effektive Vektoren müssen bestimmte Eigenschaften aufweisen:

1. Autonome Replikation in der Wirtszelle $benötigt einen Replikationsursprung, ori$
2. Multiple Klonierungsstelle $MCS$ für die Insertion von Fremd-DNA
3. Markergene $z.B. Antibiotikaresistenzgene$ zur Selektion

Highlight: Die multiple Klonierungsstelle $MCS$ enthält idealerweise nur eine Schnittstelle pro Restriktionsenzym, um gezielte Insertionen zu ermöglichen.

Benennung von Vektoren

Vektoren werden nach einem standardisierten System benannt, das Informationen über ihre Herkunft und Eigenschaften liefert. Beispiel: pBR322

Example: pBR322 ist ein bekannter Klonierungsvektor. "p" steht für Plasmid, "BR" sind die Initialen der Konstrukteure, und "322" ist die Labornummer. Die Größe $4363 bp$ und wichtige Restriktionsschnittstellen werden ebenfalls angegeben.