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DNA-Sequenzierung
26.10.2021
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Definition: Methode zur Bestimmung der Nukleotid-Abfolge in einem DNA-Molekül DNA radioaktiv markierter- Primer -ddA 5'T CAT GGCACAGCTTGA 3' which 3' AGTA C CGTGT CGAA CT 5' 5'T CA 3' 3' AGTA C C GT GT CGA ACT 5' H WANH 3 WHIHHH3' WHHHH3 -ddC WHU3 'ममममम 3' WHIH 3' WH 3 WHHH3¹ WHIHIH HIHAN 3¹ WH3' Elektro- phorese A CGT 93.1 DNA-Sequenzierung nach SANGER ddG 3' Dna-Sequenzierung Kettenabbruch-Methode nach Frederick Sanger 5' WHHHHH3¹ с A zu ddT - analysierende Sequenz 5 3¹ S +ddATP dATP, dCTP AGTRATTP +DNA-Polymerase +Primer(P) 3 Abbruch Nukleotid Adenin 5¹ Man benötigt: • die zu bestimmende DNA als Einzelstrang •DNA-Polymerase radioaktiv martierter Primer •4 Desoxynucleotid-Triphosphate 4 verschiedene Abbruchnucleotide Abbruch Adenin Funktionsprinzip: 1.Doppelhelix wird durch Hitze in 2 Einzelstränge gespalten 2 =>Primer lagert sich an Einzelstrang genetik PATCODA p*dda an und bildet kurzes Stück Doppelstrang => DNA-Polymerase verlängert den fehlenden der beiden komplementären DNA-Strange 3. Ider 4 Basen wird zum Teil als ddNTP zugegeben 4. ddNTP besitzen keine 3' Hydroxilgruppe Kettenabbruch 5. Dadurch entstehen DNA-Fragmente unterschiedlicher Länge L>Primer oder ddNTPs sind radioaktiv martiert
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