Gelelektrophorese

Gelelektrophorese • Verfahren zur Auftrennung von Makromolekülen • Trennung beruht auf unterschiedlich schneller Wanderung elektrisch geladener Moleküle zwischen den Elektroden eines Gleichspannungsfeldes in einem Gel Herstellung eines Gels: • Eingießen einer Agaroselösung in Elektrophpresekammer • Formen von Taschen (Slots) in das Gel mithilfe eines Slotkamms •Erstarren des Gels -> Überschichtung mit Pufferlösung → Mileu wird elektrisch leitend Durchführung • Vermischen der DNA-Fragmente mit Lösung aus Markerfarbstoff und Glycerin Glycerin: Erhöht die Dichte der Probe -> sinkt in die Taschen -> Markerfarbstoff: Sichtbarmachung des Fortschreitens der Elektrophorese • Überführung der Lösung mit den DNA-Fragmenten in die Slots DNA durch ihre Phosphatgruppe leicht negativ geladen -> wandert zum Pluspol Gel wirkt wie ein Sieb -> kleinere Fragmente wandern schneller als größere Fragmente werden nach ihrer Größe getrennt gleich große Fragmente konzentrieren sich zu Banden -> vorerst unsichtbar -> so lagern sich zum Beispiel die zwei Banden eines Allels (je eins von Mutter und Vater) zu einer dicken Bande an, wenn sie in ihrer Ausprägung identisch sind! Unterscheidet sich das Allel in seiner Ausprägung, gibt es zwei verschiedene dünne Banden untereinander • nach Abgießen des Puffers -> Überführung des Gels in Färbelösung -> Banden werden sichtbar • Bestimmung der Größe der vervielfältigten DNA: Fragmente mit anderen Fragmenten, deren Größe bereits bekannt ist, parallel laufen lassen Gemisch von DNA- Fragmenten unterschiedlicher Größe 00000000- DOOD ODD 8 000- 000000000 30000 000 00 300 000 000 0 längere Fragmente kürzere Fragmente

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