Grundlagen und Durchführung der Gelelektrophorese
Die Gelelektrophorese ist ein fundamentales Verfahren in der Molekularbiologie zur Auftrennung von Makromolekülen wie DNA, RNA und Proteinen. Der Gelelektrophorese Ablauf basiert auf der unterschiedlich schnellen Wanderung elektrisch geladener Moleküle in einem Gleichspannungsfeld durch ein Gel.
Herstellung des Gels
Der Gelelektrophorese Aufbau beginnt mit der Vorbereitung des Gels:
- Eine Agaroselösung wird in die Elektrophoresekammer gegossen.
- Mit einem Slotkamm werden Taschen (Slots) im Gel geformt.
- Nach dem Erstarren wird das Gel mit einer Pufferlösung überschichtet, um ein elektrisch leitendes Milieu zu schaffen.
Vocabulary: Agarose ist ein Polysaccharid, das zur Herstellung von Gelen für die Elektrophorese verwendet wird.
Durchführung der Elektrophorese
Der Gelelektrophorese Ablauf umfasst folgende Schritte:
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DNA-Fragmente werden mit einer Lösung aus Markerfarbstoff und Glycerin vermischt.
Highlight: Glycerin erhöht die Dichte der Probe, sodass sie in die Geltaschen sinkt. Der Markerfarbstoff macht das Fortschreiten der Elektrophorese sichtbar.
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Die Probenlösung wird in die Slots überführt.
Definition: DNA ist durch ihre Phosphatgruppen leicht negativ geladen und wandert daher zum Pluspol (Anode).
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Das Gel wirkt wie ein Sieb: Kleinere Fragmente wandern schneller als größere.
Example: Bei der Gelelektrophorese DNA Auswertung konzentrieren sich gleich große Fragmente zu Banden. Zwei identische Allele (von Mutter und Vater) bilden eine dicke Bande, während unterschiedliche Allele zwei dünne Banden ergeben.
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Nach Abschluss der Elektrophorese wird das Gel in eine Färbelösung überführt, um die Banden sichtbar zu machen.
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Zur Größenbestimmung der DNA-Fragmente lässt man Fragmente bekannter Größe parallel mitlaufen.
Highlight: Die Gelelektrophorese Auswertung ermöglicht es, die Größe und Menge der aufgetrennten Moleküle zu bestimmen, was für viele molekularbiologische Anwendungen von großer Bedeutung ist.
Die Gelelektrophorese Anwendung ist vielfältig und umfasst die Analyse von PCR-Produkten, die Überprüfung von Restriktionsverdaus und die Qualitätskontrolle von DNA- und RNA-Präparationen. Das Gelelektrophorese Bandenmuster auswerten ist ein wesentlicher Schritt in vielen molekularbiologischen Experimenten und erfordert Erfahrung und genaue Kenntnisse der erwarteten Fragmentgrößen.
