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Grundoperationen der Gentechnik
26.11.2021
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Isolation •Restriktionsenzyme schneiden Spender- und Transport-DNA (Plasmid) • wirkungs- und substratspezifisch: schneiden nur an definierten Stellen (Erkennungsequenz: Palindrome). • schneiden zwischen den gleichen Nucleotiden -> sticky oder glatte Enden Rekombination • Einsetzen der Fremd-DNA in eine Plasmid (-> rekombinierte DNA) • klappt nicht immer -> es gibt Plasmide mit und ohne Fremd-DNA • Plasmid = Vektor • Einschleusen des Vektors in eine Baterienzelle = Transformation -> klappt ebenfalls nicht immer Selektion • Nutzung von Plasmiden mit bspw. zwei Antibiotikaresistenzen • Schnittstelle von Gen X liegt im Antibiotikagen 1 -> Zerstörung der Resistenz gegen Antibiotikum 2 • Vermehrung auf Nährböden mit Antibiotikum II • Stempeln auf Nährböden.mit.Antibiotikum I Zershkrung -> Vergleichen der Kolonien (wächst eine Kolonie nicht mehr auf Nährboden I, so wurde das Gen genommen). • Bakterien wurden vermehrt und können nun das Protein produzieren. Vektör OO Transformation Plasmid mit t Grundoperationen der Gentechnik Antibiotikum I -L. Bakterien shrie she Medium mit Antibiotikum I kolenien besitzen keine Resistenz und somit brine. Fremd-DRA 0 Fremd-DnA Resistents Likeine Resistenz Obery finem Kolonia Ampicillin- Resistenz bein fremid-Gen Bakterium Bakterien- chromosom }} ISOLATION Plasmid rekombinante DNA (Plasmid) REKOMBINATION rekombinantes Bakterium TRANSFORMATION Plasmid wird isoliert THERMO O gereinigte DnA Zelle DnA mit dem Gen x GenX wird in Plasmid eingebaut Plasmid wird in Bakterienzelle übertragen 6989 Zellen mit Gent werden kloniert
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