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Grundoperationen der Gentechnik

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Lernzettel: Isolation, Rekombination, Selektion

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Isolation • Restriktionsenzyme schneiden Spender- und Transport-DNA (Plasmid) • wirkungs- und substratspezifisch: schneiden nur an definierten Stellen (Erkennungsequenz: Palindrome). • schneiden zwischen den gleichen Nucleotiden -> sticky oder glatte Enden Rekombination • Einsetzen der Fremd-DNA in eine Plasmid (-> rekombinierte DNA) • klappt nicht immer -> es gibt Plasmide mit und ohne Fremd-DNA • Plasmid - Vektor = • Einschleusen des Vektors in eine Baterienzelle = Transformation -> klappt ebenfalls nicht immer Selektion • Nutzung von Plasmiden mit bspw. zwei Antibiotikaresistenzen • Schnittstelle von Gen X liegt im Antibiotikagen 1 -> Zerstörung der Resistenz gegen Antibiotikum 2 • Vermehrung auf Nährböden mit Antibiotikum II • Stempeln auf Nährböden mit Antibiotikum I -> Vergleichen der Kolonien (wächst eine Kolonie nicht mehr auf Nährboden I, so wurde das Gen genommen). • Bakterien wurden vermehrt und können nun das Protein produzieren. Resisten I Vektör •Zerstörung Resistent I O OO Transformation Grundoperationen der Gentechnik Plasmid mit Fremd DNA ↳ Resistenz II Medium mit Antibiotikum I •L, Bakterien ohnie Resistenz werden aussortiert Medium mit Antibiotikum I L, wachsende Kolonien besitzen keine Resistenz und somit keine, Fremd DNA Resistent I O Fremd DNA ·Plasmid ohne Fremd-DnA L₂Resistenz I kein Plasmid Lokeine Resistenz Übertragen der ·rec Ampicillin-Resistenz Likein Fremd - Gen Bakterium BakLerien- chromosom ISOLATION Plasmid rekombinante DNA (Plasmid) REKOMBINATION rekombinantes" Bakterium Plasmid wird isoliert TRANSFORMATION W W U U D Ö M M M M On gereinigte DNA Gen X O Zelle DNA mit dem. Gen x Gen X wird in Plasmid eingebaut Plasmid wird in Bakterienzelle übertragen Zellen mit Gent werden kloniert

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H

Cool, mit dem Lernzettel konnte ich mich richtig gut auf meine Klassenarbeit vorbereiten. Danke 👍👍

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