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Vivien Hübler

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PCR

 Methode der PCR:
Denaturierung:
.
• DNA wrid auf 90-95*C erwärmt
PCR
-> Wasserstoffbrücken lösen sich
• Molekül dissoziiert in Einzelsträng

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PRC-Methode Echtzeit-PCR Diagram Fluoreszenzunterschiede Vorteile Echtheit-PCR

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Methode der PCR: Denaturierung: . • DNA wrid auf 90-95*C erwärmt PCR -> Wasserstoffbrücken lösen sich • Molekül dissoziiert in Einzelstränge Hybridisierung: • Temperatur auf 50-60*C • synthetisierte Oligonucleotide binden an Einzelstränge DNA →> Primer komplementär zur DNA -> Ausgangspunkt der Synthese neuer DNA-Stränge • gegenläufig orientierte Primer -> Hybridisierung läuft gleichzeitig ab Polymerisierung: . • Temperatur auf 70-75*C -> Taq-Polymerase Temperaturoptimum . • Taq-Polymerase synthetisiert die DNA -> Wiederholung bis gewünschte Menge der DNA vorhanden ist Methode der Echtzeit-PCR: • Ablauf wie bei der einfachen PCR-Methode • diese Methode erlaubt die direkte Detektion der PRC-Produkt- Akkumulation über Floureszenzfarbstoffe/ oder -maskierte Sonden →> Sonde wurde hinzugegeben, die an Basensequenzen liegt • Das Signal der durch eine Lichtquelle angeregten Fluoreszenzfarbstoffe korreliert dabei quantitativ mit der Menge an PCR-Produkt und kann in Echtzeit (Real-time) dargestellt werden • durch Polymerase werden Farbstoff und Quencher (Unterdrücker) . getrennt -> Licht wird emittiert -> Gensequenz ist vorhanden -> dadurch, dass der Abstand zwischen Farbstoff und Quencher grösser wird, beginnt er zu fluoreszieren (leuchten) Denaturierung Unterschiedliche Fluoreszenz bei DNA-Proben: • Person C hat die Mutation nicht, da DNA Sonde sich nicht anlagern konnte kein leuchten • Person A hat zu 100% Fluoreszenzen • Person B ist die Mutation nicht all zu oft vorhanden • bei Person A ist die Fluoreszenz auf beiden Strängen (homozygot) • bei Person B ist die Floureszenz nur auf einen Allel (heterozygot) Vorteile der Echtzeit-Pcr: • schnelleres Ergebnis, da man Fluoreszenz schon während des...

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U

Vielen Dank, wirklich hilfreich für mich, da wir gerade genau das Thema in der Schule haben 😁

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