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Restriktionsenzyme

Restriktionsenzyme

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• in einigen Bakterien können sich Phagen nicht vermehren
sie besitzen Enzyme, die die Phagen-DNA zerschneiden vermeiden

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Restriktionsenzyme • in einigen Bakterien können sich Phagen nicht vermehren sie besitzen Enzyme, die die Phagen-DNA zerschneiden vermeiden die Virusinfektion → Restriktionsenzyme/Restriktionsendonukleasen es sind mehrere Hunderte bekannt •Restriktionsenzyme schneiden die DNA in einer bestimmten Erkennungssequenz ein - diese Sequenz ist meist 4 bis 8 Basenpaaren lang, wird auch Restriktionsschnittstelle genannt. • die Enzyme sind nach der Bakterienart benannt, aus der sie stammen. sie sind substratspezifisch Beispiel E.coli: • das Restriktionsenzym EcoRI schneidet die DNA an der Basensequenz 5´-GAATTC-3′´. die Sequenz kommt statistisch einmal pro 4096 Basen vor 4 die DNA-Fragmente sind entsprechend groß • auf dem komplementärem Strang lässt sich die selbe Sequenz in 5-3 Richtung finden - wird auch eingeschnitten. - an den Schnittstellen steht jeweils ein kurzes einzelsträngiges Stück DNA über ." die Enden der beiden Stücke sind komplementär, weshalb die Bildungsaffinität hoch ist → werden als sticky ends bezeichnet durch Zugabe des Enzyms Ligase können die Stränge sich wieder verbinden • wenn die DNA methyliert ist, können die Restriktionsenzyme die DNA nicht schneiden manche Restriktionsenzyme vollziehen einen geraden Schnitt durch die DNA es entstehen blunt ends • mithilfe dieser Restriktionsenzyme und Ligase kann man in-vitro DNA unterschiedlicher Herkunft kontrolliert in definierte Fragmente schneiden und neu kombinieren. - ein gewünschtes Gen, damit dem selben Restriktionsenzyme geschnitten wurde, wie zB. ein Plasmid in dieses einbauen, da die klebrigen Enden sich paaren "es entsteht ein Vektor,...

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