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Restriktionsenzyme
17.11.2021
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in einigen Bakterien können sich Phagen nicht vermehren sie besitzen Enzyme, die die Phagen-DNA zerschneiden → vermeiden die Virusinfektion → Restriktionsenzyme/Restriktionsendonukleasen Des sind mehrere Hunderte bekannt Restriktionsenzyme •Restriktionsenzyme schneiden die DNA in einer bestimmten Erkennungssequenz ein - diese Sequenz ist meist 4 bis 8 Basenpaaren lang, wird auch Restriktionsschnittstelle genannt die Enzyme sind nach der Bakterienart benannt, aus der sie stammen sie sind substratspezifisch Beispiel E.coli: • das Restriktionsenzym EcoRI schneidet die DNA an der Basensequenz 5-GAATTC-3 die Sequenz kommt statistisch einmal pro 4096 Basen vor die DNA-Fragmente sind entsprechend groß auf dem komplementärem Strang lässt sich die selbe Sequenz in 5-3 Richtung finden - wird auch eingeschnitten 9 - an den Schnittstellen steht jeweils ein kurzes einzelsträngiges Stück DNA über CO die Enden der beiden Stücke sind komplementär, weshalb die Bildungsaffinität hoch ist werden als sticky ends bezeichnet durch Zugabe des Enzyms Ligase können die Stränge sich wieder verbinden • wenn die DNA methyliert ist, können die Restriktionsenzyme die DNA nicht schneiden. manche Restriktionsenzyme vollziehen einen geraden Schnitt durch die DNA es entstehen blunt ends ·LD • mithilfe dieser Restriktionsenzyme und Ligase kann man in-vitro DNA unterschiedlicher Herkunft kontrolliert in definierte Fragmente schneiden und neu kombinieren - ein gewünschtes Gen, damit dem selben Restriktionsenzyme geschnitten wurde, wie zB. ein Plasmid in dieses einbauen, da die klebrigen Enden sich paaren. es entsteht ein Vektor, der das Fremdgen enthält.
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