Gentransfer und Selektion rekombinanter DNA
Der Prozess der rekombinanten DNA-Technologie wird detailliert auf dieser Seite dargestellt. Er zeigt die Schritte zur Erzeugung und Vermehrung von genetisch modifizierten Bakterien.
Zunächst wird ein Plasmid als Vektor verwendet. Dieses enthält wichtige Elemente wie einen Replikationsursprung ori und Markergene für Antibiotikaresistenzen. Die multiple cloning site MCS des Plasmids bietet Schnittstellen für verschiedene Restriktionsenzyme.
Vocabulary: Multiple Cloning Site MCS - Ein Bereich im Plasmid mit mehreren Erkennungssequenzen für Restriktionsenzyme, der das Einfügen von Fremd-DNA erleichtert.
Das gewünschte Fremdgen und das Plasmid werden mit demselben Restriktionsenzym z.B.EcoRI geschnitten. Dies erzeugt komplementäre "sticky ends", die eine gezielte Verbindung ermöglichen.
Example: EcoRI ist ein häufig verwendetes Restriktionsenzym, das die DNA-Sequenz G↓AATTC erkennt und schneidet.
Die geschnittenen DNA-Fragmente werden mit Hilfe einer Ligase verbunden, wodurch ein rekombinantes Plasmid entsteht. Dieses wird dann in kompetente Bakterienzellen eingebracht, deren Zellmembran durch Behandlung mit Calciumchlorid durchlässig gemacht wurde.
Definition: Kompetente Bakterien sind Zellen, die durch spezielle Behandlung fähig gemacht wurden, fremde DNA aufzunehmen.
Die transformierten Bakterien werden auf Nährböden mit Antibiotika kultiviert. Nur Bakterien, die das rekombinante Plasmid aufgenommen haben, können auf diesen Nährböden wachsen, da sie die entsprechenden Resistenzgene besitzen.
Highlight: Die Selektion durch Antibiotikaresistenzen ist ein Schlüsselelement zur Identifizierung erfolgreich transformierter Bakterien.
Durch geschickte Kombination von Antibiotikaresistenzen kann zwischen Bakterien mit rekombinantem Plasmid nureineResistenz und solchen mit unverändertem Plasmid beideResistenzen unterschieden werden.
Quote: "Selektion durch Antibiotikaresistenzen" ist ein zentrales Prinzip in der rekombinanten DNA-Technologie.
Diese Methode ermöglicht die effiziente Produktion von rekombinanten Proteinen in Bakterien, was weitreichende Anwendungen in der Biotechnologie, Medizin und Forschung hat.
