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Gentransfer und Selektion
16.9.2021
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Markeigen 1 →→Gen für &.B. Tetracyclinresistenz Ablauf gentransfer und Selektion Ziel Vermehring rekombinanter DNA Vektor Plasmid Temperatur- wechsel auf Einsatz derselben Restrictionsenzyme Baktenenzelle Transformation 37° C V D G ori -Replikations urspring Behandlung mit Calciumchlona ← S Stempel ↓ Übertragung O der Bantenenholonie phierch Stempels "Nahrboden mit" Ampia llin multiple cloning site (MCS) hat eine Schnittstelle pro Restrictionsenzum, um Plasmid aufzuschneiden Funktion des Markergens Marhergen 2 wird deaktiviet -7 Gen zB. für Ampicillinvesitenz Restriction of me Fremdgen E z. B. EcoRI V rekombinantes Plasmid inal. Fremdlegen Selektion durch Antibiotikaresistenzen V gewienschle Volonie Lof Bantenenhulter aus geurenschter Kolonie •Sticky ends kompetent gemachtes Baktenum Fellmembran wird durchlässig ) Lugabe gen mit gleichen Schritt purkten ← Zugabe Ligase Cintreu geglicht → Nährboden mit Tetracyclin • gewünschte Colonie Pella tolonie mit Plasmid ohne Fromdagen, besitzt beide AB-Pesistenten
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