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Gelelektrophorese | Genetik
9.5.2021
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ABLAUF Gelelektophorese Geltaschen kathode ++ Banden Agarose- gel Anode 2. Schritt die zwei Elektroden (Anode & Kathode) werden an den Strom geschlos- sen, sodass eine elektrische Spannung entsteht die negativ geladenen Moleküle wandern in Richtung der pasitiv ge- ladenen Anode → Je kürzer die Fragmente sind, desto besser & schneller können sie sich durch das Gel bewegen! 1. Schritt - DNA - Abschnitte werden durch Re- striktionsenzyme in verschieden große Fragmente zerschnitten 3. Schritt sobald das Ende des Gels erreicht ist, wird der Strom abgeschaltet → es bilden sich unsichtbare Banden, wo jeweils gleich lange Moleküle befinden - um die Banden sichtbar zu machen, wird das durch besondere Fär- betechniken (mit fluoreszierenden Reagenzien) gefärbt negativ geladene ONA-Fragmente (aufgrund der Phosphatgruppe) wer- den in die Geltaschen gefüllt - verschiedene Proben können parallel nebeneinander gleichzeitig durch dasselbe Gel wandern - Gel wird in eine Elektrophoresekam mer mit Pufferlosung gelegt, in der sich die Elektroden befinden Probe (DNA o. Proteine) +++++ 2 → 10 1- ŢI + + + 10 0 +++++ 3 AUSWERTUNG 44 Bp 40 BP 36 Bp 32 BP 30 ВР 27 Bp 25 Bp 21 Bp 20 Bp 18 Bp 15 Bp 12 Bp 5 Bp Massen- standards ||| Person 1 Person 2 Täter ANWENDUNG - es bilden sich Banden mit Frag- menten mit gleicher Masse → besitzen gleiche Wanderungs- geschwindigkeit - Banden werden durch Färbetech- niken sichtbar gemacht - resultierende Banden werden mit schon bekannten Banden verglichen - Massenstandards werden zugleich mitlaufen gelassen → Moleküle, deren Masse man kennt → kann im Vergleich auf die Mas- se der unbekannten Fragmente schließen GELELEKTROPHORESE VON PROTEINEN - Ladung von Proteinen hängt von ihren Aminosäuren ab - gleich große Proteinmoleküle können unterschiedlich schnell & in unter- schiedliche...
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Alternativer Bildtext:
Richtungen wandern - Proteine werden denaturiert & mit entfalteten Aminosäuren mit spezifischen negativ geladenen Teilchen → Proteine haben eine negative Ladung & wandern in Abhängigkeit von der Molekularmasse durch das Gel - Kriminalistik; Tätersuche - Vaterschaftsnachweise - Paläontologie; Untersuchungen an Fossilien - Humangenetik; Ermitteln von Erbgängen & Genotypen - Lebensmittelanalytik ZIEL - Moleküle lassen sich voneinander trennen (meistens DNA, RNA oder Prote- ine) & in Bandenmustern sichtbar machen - Identifikation von Molekülen, z. B. bei der STR-Analyse